生物学论文_应用细胞工厂传代原代地鼠肾细胞
文章摘要:目的 应用细胞工厂建立原代地鼠肾（primaryhamsterkidneycells，PHK）细胞传代培养工艺，培养狂犬病病毒，为PHK细胞和人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞）的规模化放大奠定基础。方法选用SPF级地鼠，无菌取肾，经消化分散接种到细胞工厂中，在37℃下培养筛选出PHK细胞静置培养的最适细胞接种密度；在最适细胞接种密度下，从0.20%水解乳蛋白MEM培养基和改良的DMEM/F12培养基中筛选出更适宜地鼠肾细胞静置培养的培养基；同时对消化液A（含0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶溶液）和消化液B（含0.30%柠檬酸钠的0.25%胰蛋白酶溶液）的消化效果进行比对，选择适宜的消化液；最后，使用最佳培养基和消化液对PHK细胞进行传代，观察细胞生长情况并分析代谢水平；对同一细胞批不同代次的单层细胞（P0代、P1代和P2代）接种狂犬病病毒aG株，进行多次收获，检测单次病毒收获液病毒滴度。结果PHK细胞（P0代）在细胞工厂中适宜的接种密度为0.30×106～0.50×106 cells/cm2；改良的DMEM/F12培养基和消化液B更适用于PHK细胞的培养和消化传代；在40层细胞工厂（CF40）中使用最佳培养基和消化液传代地鼠肾细胞至第4代（P4代），随着代次的增加，收获的细胞密度降低、葡萄糖消耗减少和乳酸生成下降；P0代、P1代和P2代细胞均有较佳的细胞状态和增殖能力；用P0代、P1代和P2代细胞培养狂犬病病毒，能有效收获4次，且单次病毒收获液病毒滴度结果符合要求，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 本研究成功建立了PHK细胞传代培养工艺，为PHK细胞的规模化放大，冻干人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞）生产工艺的改进、变更以及产能的扩大提供参考。
文章关键词:原代地鼠肾细胞,细胞工厂,培养基,消化液,传代培养,狂犬病病毒,
论文作者:李佳林 张志刚 刘晓巍 肖蕾 徐小明 张艳 李守丽 于潆 李红芳
论文分类号: R373.9
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