水产和渔业论文_传染性造血器官坏死病灭活疫苗
文章摘要:为了研发用于预防传染性造血器官坏死病（Infectious hematopoietic necrosis，IHN）灭活疫苗，本实验以不同感染复数（multiplicity of infection，MOI）在胖头鱥上皮细胞（Epithelioma papulosum cyprinid，EPC）上对传染性造血器官坏死病毒（Infectious hematopoietic necrosis virus，IHNV）进行连续传代培养，通过测定各代病毒滴度，结合病毒收获时间确定最佳增殖方案；采用不同浓度的β-丙内酯（β-propanolactone，BPL）在24℃下灭活，经安全性试验验证后确定最佳灭活条件。以不同剂量腹腔注射免疫虹鳟，以磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution，PBS）为阴性对照组，通过检测攻毒后相对免疫保护率（relative percent survival，RPS）、免疫相关因子表达量及血清中和抗体效价来分析该疫苗的保护效果。结果显示，最佳增殖方案为以MOI为0.000 1接种，15℃培养3 d；最佳灭活条件为以终浓度3.0 mmol/L的BPL将IHNV在24℃下灭活24 h；以最佳免疫剂量10 μL/尾腹腔注射免疫虹鳟，免疫后7、21、45、60 d的相对免疫保护率分别为91.37%、84.28%、84.15%和47.5%，免疫后60 d时RPS显著小于其余各免疫组；免疫相关基因的实时荧光定量PCR（realtime quantitative PCR，RT-qPCR）结果显示，与阴性对照组相比，Mx-1和IFN-γ表达量在免疫后7、15、30 d脾脏和头肾中均显著上调，在第7天时达到最大值（5倍）；CD4和IgM表达量在免疫后15 d脾脏和头肾中均显著上调；在免疫后第30、45、60天虹鳟血清IHNV中和抗体效价依次为67.25、43.4和29.78，呈下降趋势且各组间差异显著。研究表明，该灭活疫苗可诱导虹鳟产生特异性免疫和非特异性免疫反应，对虹鳟具有显著的免疫保护作用。本研究为IHNV灭活疫苗研发提供参考。
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