生物学论文_GⅡ.17型诺如病毒样颗粒的制备及鉴
文章摘要:【背景】诺如病毒（norovirus，NoV）是引发全球人类急性胃肠炎的主要食源性致病原，具有广泛的遗传多样性，其中GⅡ.17型是亚洲地区的优势流行株，危害最为严重。研究表明，通过基因工程技术制备的诺如病毒样颗粒（virus-like particle，VLP）具有良好的免疫保护作用，是目前NoV疫苗研发的主要思路。【目的】利用Escherichia coli原核表达系统制备GⅡ.17型诺如病毒的VLPs，为GⅡ.17型NoV疫苗的研发奠定基础。【方法】合成GⅡ.17型NoV衣壳蛋白VP1的基因并克隆入pET28a-MsyB原核表达质粒中，将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）中进行表达，通过烟草蚀纹病毒（tobacco etch virus，TEV）蛋白酶去除融合标签，利用His-Tag镍柱纯化获得天然VP1蛋白，利用SDS-PAGE、Western Blot和透射电镜观察等手段，对纯化后的VP1蛋白反应原性及其形成的结构进行初步鉴定。【结果】MsyB-VP1融合蛋白能够以可溶形式大量表达，其最适表达条件为：IPTG浓度0.8 mmol/L，37 ℃诱导8 h；TEV蛋白酶酶切后的VP1纯化蛋白能够与鼠抗GⅡ.17型NoV VP1多克隆抗体特异性结合，并能够自组装形成直径约为40 nm的病毒样颗粒。【结论】利用原核表达系统成功制备了GⅡ.17型诺如病毒VLPs，有望成为GⅡ.17型诺如病毒的候选疫苗。
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