畜牧与动物医学论文_基于马赛克HA序列的H9亚型
文章目录
1 材料与方法
1.1 菌(毒)株、载体、细胞及实验动物
1.2 主要试剂
1.3 Mosaic HA序列(HAm/H9)的设计与合成
1.4 重组质粒的构建与病毒拯救
1.5 重组病毒生长曲线测定
1.6 重组病毒的免疫原性测定
1.6.1 灭活疫苗的制备与免疫
1.6.2 血凝抑制(HI)抗体测定
1.6.3 中和抗体测定
1.6.4 攻毒保护效果
2 结 果
2.1 HAm/H9序列抗原表位预测分析
2.2 重组质粒的构建与病毒拯救
2.3 重组病毒的生长曲线
2.4 重组病毒的免疫原性
2.4.1 HI抗体
2.4.2 中和抗体
2.4.3 攻毒保护效果
3 讨 论
4 结 论
文章摘要:H9亚型禽流感在我国家禽中广泛流行,给养禽业造成巨大经济损失的同时,也严重威胁着公共卫生安全。H9亚型禽流感病毒（avian influenza virus, AIV）具有高度遗传变异性,导致流行株和疫苗株之间抗原匹配性差,从而影响疫苗的临床保护效果,急需研发一种高效、具有交叉保护性的通用型H9亚型禽流感疫苗。马赛克疫苗是针对遗传多样性病原体设计,通过整合所有抗原序列获得一条抗原表位覆盖最广泛的嵌合蛋白,并制备疫苗。本研究参考mosaic疫苗设计原则,设计、优化并合成了一条H9亚型禽流感病毒的mosaic血凝素（hemagglutinin, HA）基因序列,采用反向遗传操作技术,以H1N1亚型流感病毒PR8株为骨架,以mosaic H9HA序列替换PR8株的HA片段,获得重组病毒rPR8-HAm/H9。将其制备为灭活疫苗并免疫SPF雏鸡,监测抗体水平、攻毒保护效果,评价其交叉保护效果。结果表明,重组病毒rPR8-HAm/H9灭活疫苗免疫SPF雏鸡,可诱导机体产生较高水平的HI抗体和中和抗体,可显著抑制攻毒后病毒的脱落,对H9N2 AIV JM0305株的攻毒保护率为80%。rPR8-HAm/H9灭活疫苗可以对异源H9N2 AIV JM0305株产生较好的交叉攻毒保护,为研发基于马赛克技术的禽流感通用疫苗提供了前期基础。
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