基础医学论文_汉滩病毒PS-6单克隆抗体的制备及

文章摘要:目的 制备汉滩病毒（Hantaanvirus，HTNV）PS-6株小鼠单克隆抗体（monoclonalantibody，mAb），建立HTNV抗原双抗体夹心ELISA检测方法，验证方法的检测性能并初步应用于疫苗抗原含量检测。方法 以HTNVPS-6株灭活全病毒原液作为免疫原，采用小鼠杂交瘤融合技术，筛选mAb杂交瘤细胞株，制备mAb；用间接ELISA测定mAb效价；Westernblot鉴定mAb特异性；用间接ELISA测定mAb相对亲和力；经抗体配对筛选，建立双抗体夹心ELISA病毒抗原检测方法。以I型肾综合征出血热疫苗标准品作为定量标准，验证该方法的检测限、线性范围、特异性、准确度、精密度；对6批次I型肾综合征出血热灭活疫苗原液进行检测，初步验证该方法的适用性。结果 获得4株稳定分泌抗HTNVPS-6特异性抗体的阳性杂交瘤细胞株：4B2、3H8、5D7及2A7；间接ELISA检测腹水抗体效价均在10⁶～10⁷；Westernblot鉴定4株mAb均能特异性识别HTNVPS-6；相对亲和力为4B2＞5D7＞3H8＞2A7；抗体ELISA配对筛选后，选用5D7作为包被抗体，4B2作为标记抗体，包被抗体工作浓度为10μg/mL，HRP标记抗体工作浓度为1∶5 000。该方法对HTNVPS-6抗原检测限为0.039 1 μg/mL；检测线性范围为0.078 1～2.5000μg/mL，R²>0.97；检测与I型肾综合征出血热疫苗生产主要原辅料成分、II型肾综合征出血热疫苗、森林脑炎疫苗及甲肝疫苗均无交叉反应；准确度验证，病毒抗原回收率在95.8%～110.5%之间；试验内和试验间精密度，变异系数分别在6.72%～8.03%、8.24%～9.70%之间。用该方法检测6批次I型肾综合征出血热灭活疫苗原液，结果均呈剂量依赖性。结论 成功制备HTNV PS-6株mAb，建立病毒抗原双抗体夹心ELISA抗原检测方法，方法准确、可靠，可初步应用于I型肾综合征出血热灭活疫苗科研、生产过程病毒抗原检测。

文章关键词:

论文分类号:R392

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