生物学论文_鉴别犬瘟热病毒野毒株与疫苗株双重

文章目录

1 材料

1.1 病毒与检测样品

1.2 试剂盒

1.3 主要仪器

2 方法

2.1 引物的设计与合成

2.2 病毒基因组RNA的提取与浓度的测定

2.3 CDV野毒株一步法RT-PCR反应条件的优化及检测

2.4 CDV疫苗株一步法RT-PCR反应条件的优化及检测

2.5 CDV野毒株与疫苗株双重一步法RT-PCR反应条件的优化及检测

2.6 特异性试验

2.7 敏感性试验

2.8 重复性试验

    2.8.1 批内重复性试验

    2.8.2 批间重复性试验

2.9 符合性试验

2.10 临床应用

3 结果与分析

3.1 病毒基因组RNA浓度的测定

3.2 CDV野毒株一步法RT-PCR检测

3.3 CDV疫苗株一步法RT-PCR检测

3.4 CDV野毒株与疫苗株双重一步法RT-PCR检测

3.5 特异性试验

3.6 敏感性试验

3.7 重复性试验

3.8 符合性试验

3.9 临床应用

4 讨论

文章摘要:为了建立一种简单、快速鉴别检测犬瘟热病毒（CDV）野毒株与疫苗株的方法，试验根据GenBank中CDV野毒株与疫苗株H基因序列设计鉴别检测引物，建立鉴别CDV野毒株与疫苗株一步法RT-PCR,并验证该方法的特异性、敏感性、重复性及符合性；利用建立的鉴别CDV野毒株与疫苗株双重一步法RT-PCR检测方法对2017—2020年采集于江苏省11个不同地市的505份发病犬喉拭子样品和病料样品进行检测，确定CDV野毒株与疫苗株双重一步法RT-PCR的临床适用性。结果表明：该方法对CDV野毒株、CDV疫苗株、CDV野毒株/疫苗株可分别扩增出477 bp、677 bp、477 bp/677 bp的特异性条带，而检测犬细小病毒（CPV）、犬腺病毒（CAV）、犬副流感病毒（CPIV）、犬冠状病毒（CCV）均为阴性；该方法的检测灵敏度为23.1 pg RNA;与RFLP方法的符合率为100%;批内重复性检测和批间重复性检测的结果完全一致；利用该方法检测505份临床样品，CDV野毒株和疫苗株的阳性率分别为8.91%和72.48%。说明建立的鉴别CDV野毒株与疫苗株一步法RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性、准确性和临床适用性。

文章关键词:

论文作者:梅胜尧 张玉堂 张逸民 孙宝海 刘晶 

论文DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.01.0257

论文分类号:S852.65

上一篇：医药卫生方针政策与法律法规研究论文_女大学生
下一篇：没有了